目前法醫(yī)實(shí)驗(yàn)室用于基因組DNA定量最普遍的方法就是所謂的“斑點(diǎn)雜交”法。此方法對(duì)人類和其他靈長類DNA具有特異性，因?yàn)樗囊欢?0bp的探針與靈長類特異的僅衛(wèi)星DNA序列D1721互補(bǔ)，此序列位于17號(hào)染色體。斑點(diǎn)雜交法早期使用放射性探針，經(jīng)修改和商業(yè)化后使用化學(xué)發(fā)光或比色檢測技術(shù)。
斑點(diǎn)雜交法首先是將基因組DNA點(diǎn)在尼龍膜上，然后加入人類特異性探針，比較樣品和一系列標(biāo)準(zhǔn)品的信號(hào)強(qiáng)度。斑點(diǎn)雜交是相對(duì)定量法，將已知濃度的樣品DNA進(jìn)行梯度稀釋后得到一系列標(biāo)準(zhǔn)品，未知樣品與標(biāo)準(zhǔn)品比較得出未知樣品的濃度。由于斑點(diǎn)雜交膜上的未知樣品與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)是用肉跟來辨別的，所以易受分析者的主觀影響。采用CCD照相圖像系統(tǒng)的數(shù)碼抓捕和斑點(diǎn)雜交圖像定量可以改善其分析過程。
通常，一張斑點(diǎn)雜交膜上可同時(shí)檢測30個(gè)樣品，待測樣品兩側(cè)分別加6—8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品用來比對(duì)。如20ng、10ng、5ng、2.5ng等。一般用于此定量實(shí)驗(yàn)的DNA模板量是5ul。
此項(xiàng)檢測要耗費(fèi)幾個(gè)小時(shí)來完成，但相當(dāng)靈敏，因?yàn)樗蓹z測單鏈和雙鏈DNA，其檢測量低至約150pg或50個(gè)拷貝的人類基因組DNA。150pg標(biāo)準(zhǔn)DNA的X線膠片感光核檢測只需15分鐘。對(duì)于化學(xué)發(fā)光檢測法，通過延長X線膠片曝光時(shí)間和在膜上點(diǎn)更稀濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品，可將靈敏度提高到150pg以下。有報(bào)道通過長達(dá)3個(gè)小時(shí)的曝光可檢測到10~20pg水平。一些法醫(yī)工作者甚至雜交檢測看不到結(jié)果時(shí)，繼續(xù)進(jìn)行DNA分析，還經(jīng)常能獲得成功的STR分型。所以，斑點(diǎn)雜交定量并不像期望的那樣靈敏。
在2004年初，ABI公司推出了商品化斑點(diǎn)雜交定量產(chǎn)品，稱為Quant-iBlot人類DNA定量試劑盒。這個(gè)試劑盒用17號(hào)染色體上的一段DNA探針檢測樣本中人類DNA濃度的水平。應(yīng)切記此項(xiàng)技術(shù)雖是“人類特異性”檢驗(yàn)，但對(duì)黑猩猩和大猩猩之類的靈長類動(dòng)物也呈陽性，因人類和其余靈長類動(dòng)物DNA序列存在相似性。
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